無聊的小編最近統(tǒng)計了一下《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》的高頻詞匯（數(shù)的準(zhǔn)不準(zhǔn)不重要，重點看條例精神），除了“醫(yī)療器械”這個絕對主角出現(xiàn)347次外，“應(yīng)當(dāng)”一詞出現(xiàn)了117次屈居第二（意思也很明白，眾企業(yè)聽令的意思）。

接下來重點來了，“有效”出現(xiàn)32次、“安全”出現(xiàn)29次，并且條例開篇第一條即點明了政府對于醫(yī)療器械產(chǎn)品（含IVD）的最重要的兩點要求——安全！有效！

“第一條?為了保證醫(yī)療器械的安全、有效，保障人體健康和生命安全，制定本條例?！?

對于我們IVD產(chǎn)品而言，有效的產(chǎn)品本身就是在保護(hù)受試者的安全。因而，在IVD產(chǎn)品的研制、生產(chǎn)和使用過程，最重要的事情就是確保產(chǎn)品有效——穩(wěn)定、持續(xù)的有效。

在確保產(chǎn)品有效性的過程中，企業(yè)參考品擔(dān)任“標(biāo)尺”的角色，好的企業(yè)參考品能夠準(zhǔn)確衡量產(chǎn)品的性能，如同一把量程適中的標(biāo)尺一樣。但是在現(xiàn)實操作過程中，卻未必都設(shè)置了符合要求的參考品。比如預(yù)期用途為糞便中病原菌抗原檢測的試劑，選擇純細(xì)菌培養(yǎng)物作為參考品，就有可能無法準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)臨床應(yīng)用過程中產(chǎn)品的最低檢出限。

本文針對定性產(chǎn)品，將企業(yè)參考品相關(guān)的內(nèi)容單獨摘出來，與大家分享一下，限于經(jīng)驗閱歷，不正之處歡迎交流與指正。

首先，原材料是產(chǎn)品質(zhì)量的基礎(chǔ)。對于原材料如何進(jìn)行評價、如何確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，每個企業(yè)都有自己的方法。實際操作過程中，多數(shù)企業(yè)均是使用企業(yè)內(nèi)部參考品作為評價標(biāo)準(zhǔn)?？乖⒖贵w、探針、酶等主要原材料除了進(jìn)行純度、活性等方面的指標(biāo)檢測外，最重要的是進(jìn)行功能性試驗（功能性試驗通常將原材料組裝成試劑盒小樣，使用企業(yè)內(nèi)部參考品進(jìn)行檢測）來篩選和評估原材料。

其次，對于生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的確定也主要依賴于企業(yè)內(nèi)部參考品。主要生產(chǎn)工藝包括引物探針、酶、抗原、抗體的濃度；包被時間；顯色系統(tǒng)濃度和用量等。主要反應(yīng)體系包括被測樣本用量、試劑用量、反應(yīng)的溫度、濕度、時間等。通過企業(yè)參考品評估比較不同的生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系，最終確定最佳方案。

因而合理設(shè)置企業(yè)內(nèi)部參考品是非常重要的。如果參考品的設(shè)置不合理或者存在缺陷，那就會造成整個產(chǎn)品的原材料選擇、生產(chǎn)工藝的確定和反應(yīng)體系的組成均存在較大的問題，導(dǎo)致產(chǎn)品的質(zhì)量不能達(dá)到臨床使用的安全性和有效性，容易在臨床檢測過程中出現(xiàn)錯誤結(jié)果而影響臨床的診斷和治療。

原則要求申請人應(yīng)提供企業(yè)參考品的詳細(xì)制備過程，包括組成、來源、毒株特性（如名稱、型別、濃度）、溯源及定值資料等信息。本部分簡要介紹通常情況下至少需要包括的四種參考品。

1）陽性參考品

主要可反映產(chǎn)品檢測的靈敏度以及對不同型別被測物的檢出能力。

（1）應(yīng)盡可能包括強(qiáng)陽性參考品、中等陽性參考品、弱陽性參考品。

（2）應(yīng)盡可能包括臨床樣本中所有可能檢測到的型別及亞型。

（3）應(yīng)使用金標(biāo)準(zhǔn)或適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行確認(rèn)，包括被檢測物的存在以及濃度。

如原則規(guī)定“陽性參考品應(yīng)包含DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4型標(biāo)準(zhǔn)毒株或臨床分離株”

2）陰性參考品

為不含被測物的陰性樣本，主要用途是反映產(chǎn)品檢測的特異性。

（1）?高值陰性參考品，可以驗證產(chǎn)品檢測的穩(wěn)定性并可進(jìn)一步驗證產(chǎn)品Cut Off值的設(shè)定是否合理。

（2）?含有可能會產(chǎn)生交叉反應(yīng)物質(zhì)的樣本（可能與被測物同源性的病原微生物、抗體等，對于微生物檢測還應(yīng)具有采樣部位正?？赡芗纳奈⑸铮约耙鹣嗨婆R床癥狀的病原微生物），對反映產(chǎn)品檢測的特異性十分重要。

（3）?治療藥物干擾的樣本，包括對于該檢測項目可能的治療藥物及含有常規(guī)治療藥物濃度的樣本。

（4）?應(yīng)使用金標(biāo)準(zhǔn)或適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行確認(rèn)，確認(rèn)該檢測物為陰性。

如原則規(guī)定“陰性參考品則主要涉及對分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗證情況”

3）最低檢測限參考品

評價定性產(chǎn)品檢測下限的依據(jù)，是評價產(chǎn)品檢測能力的重要工具。

（1）如被測物包括多個型別和亞型，至少選擇三個主要型別或亞型進(jìn)行設(shè)置。

（2）最低檢出限是評價產(chǎn)品批間一致性的重要指標(biāo)。因此，必須對最低檢出限參考品進(jìn)行被測物的定量或半定量，確保其自身的批間一致方能發(fā)揮作用。

（3）可以采用藥監(jiān)局已經(jīng)批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品、質(zhì)量較好的同類定量試劑對參考品進(jìn)行定值。如該檢測項目存在國家或國際的定量標(biāo)準(zhǔn)品，則應(yīng)對該參考品進(jìn)行量值的溯源。如該檢測項目沒有定量檢測試劑可以進(jìn)行參考，則可以采用其它方法或金標(biāo)準(zhǔn)的方法對參考品進(jìn)行定量或半定量。

4）精密度參考品

可反映產(chǎn)品檢測的重復(fù)性以及重復(fù)檢測的穩(wěn)定性

（1）?應(yīng)是包括被測物的主要型別不同濃度的樣本。

（2）?檢測次數(shù)一般10次左右，次數(shù)過多或過少均無法客觀反映產(chǎn)品檢測的重復(fù)性。

如原則規(guī)定“精密度參考品應(yīng)至少包含兩個濃度水平，其中包含弱陽性水平。”

基質(zhì)效應(yīng)

正如軍事訓(xùn)練的原則“仗怎么打，兵就怎么練”一樣，企業(yè)參考品應(yīng)盡可能與臨床檢測的樣本一致，如此才能客觀準(zhǔn)確反映試劑的有效性。

參考品的基質(zhì)應(yīng)與臨床被檢樣本相同，如完全相同基質(zhì)的樣本不易獲得，應(yīng)采用盡可能與臨床被檢樣本基質(zhì)接近的樣本，并對樣本的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究。

《YY/T 1652-2019 體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求》中對“基質(zhì)效應(yīng)”有如下講述：

理想狀態(tài)下，質(zhì)控物的成分應(yīng)盡可能的接近人樣本的成分，從而最小化基質(zhì)帶來的影響，正確反映樣本的檢測值。

在實際研制中，為了減少消耗，更加方便和安全，會對基質(zhì)進(jìn)行一些改變。例如，動物或合成的基質(zhì)被用來保護(hù)實驗人員不受感染病原體的侵害；防腐劑，穩(wěn)定劑，抗菌劑和澄清劑也會被加入來增加質(zhì)控物的易用性和穩(wěn)定性；生產(chǎn)過程（例如，凍干或滅活）能夠顯著改變質(zhì)控物的物理，化學(xué)和生物特性。盡管各種基質(zhì)和添加劑有益處，但是這些與人樣本的差異可能會導(dǎo)致質(zhì)控物不能完全反映人樣本的檢測性能。因此，建議制造商在研究過程中對質(zhì)控物的基質(zhì)進(jìn)行評價，在質(zhì)控物基質(zhì)和人樣本中平行加入能覆蓋測量范圍的被測物，比較這些結(jié)果來確定質(zhì)控物基質(zhì)相對于天然樣本的偏差、精密度差異和穩(wěn)定性差異等。必要時可參考CLSI指南EP-14、EP-30進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)評估。

參考物質(zhì)的來源

（1）WHO是世界上體外生物診斷試劑參考物質(zhì)的主要提供商，長期致力于高品質(zhì)的國際參考物質(zhì)的研發(fā)工作，為各國提高體外診斷檢測體系的準(zhǔn)確性和可靠性提供支持。在其已經(jīng)發(fā)布和正在研制的參考物質(zhì)中，大約95％由英國國家生物制品檢定所（The National Institute for Biological Standards and Control，NIBSC）提供。

（2）在我國，國家藥品、醫(yī)療器械（包括體外診斷試劑）等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究、方法和管理工作由中國食品藥品檢定研究院（簡稱：中檢院）負(fù)責(zé)。目前查詢?nèi)肟跒?/aoc.nifdc.org.cn/sell/home/search.html。

（3）如果沒有國際和國內(nèi)同類別的參考物質(zhì)提供，那就需要充分發(fā)揮大家的聰明才智，結(jié)合上述的主要原則進(jìn)行設(shè)置。在制備過程中可以借鑒中檢院的思路，比如《人類白細(xì)胞抗原B27 核酸檢測國家參考品的建立》一文講述的國家參考品的建立過程。

文章中對樣本來源如何描述（志愿者！）、如何進(jìn)行定制、如何進(jìn)行穩(wěn)定性研究等都講得很清楚。

文章摘錄

董勁春老師在《定性檢測用體外診斷試劑的企業(yè)內(nèi)部參考品的設(shè)置》中提到：

（1）陽性參考品的制備可將強(qiáng)陽性參考品使用健康人的陰性血清進(jìn)行系列稀釋得到不同稀釋度的陽性樣本，該稀釋用陰性血清不能對產(chǎn)品檢測產(chǎn)生不利的影響。同時還應(yīng)在臨床樣本中選擇不同陽性強(qiáng)度的樣本直接作為參考品。

（2）選擇不同型別的強(qiáng)陽性樣本作為基礎(chǔ)樣本，使用健康人的陰性血清對強(qiáng)陽性樣本進(jìn)行倍比稀釋得到一系列稀釋度的樣本，該稀釋過程必須保證樣本的基質(zhì)保持不變。使用待評價產(chǎn)品對不同稀釋度的參考品進(jìn)行檢測，每個稀釋度參考品至少檢測三次，直至檢測為陰性結(jié)果為止。檢測為陽性的最高稀釋度參考品為最低檢出限參考品。

（3）在技術(shù)審評過程中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有些申報企業(yè)在設(shè)置該參考品時只是選擇一個臨床的強(qiáng)陽性樣本，然后進(jìn)行倍比稀釋，對系列稀釋的參考品進(jìn)行檢測，直至檢測到結(jié)果為陰性的參考品，并將上一個稀釋度參考品設(shè)置為最低檢出限的評價標(biāo)準(zhǔn)，或?qū)⒃搮⒖计返南♂尪仍O(shè)定為評價標(biāo)準(zhǔn)。但是其并不能清楚的確定參考品中的被測物的具體濃度。因此，這種設(shè)置并不能有效的評價產(chǎn)品的最低檢出限，也不能使不同批次的參考品保持一致性。所以應(yīng)采用可能的方法對該參考品進(jìn)行被測物的定量或半定量，以期給出最低檢出限參考品中的被測物的具體量值。

參考文獻(xiàn)：

【1】?定性檢測用體外診斷試劑的企業(yè)內(nèi)部參考品的設(shè)置

【2】?體外生物診斷試劑參考物質(zhì)的現(xiàn)狀與發(fā)展

【3】?人類白細(xì)胞抗原B27核酸檢測國家參考品的建立

【4】?YY/T 1652-2019體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求

【5】?登革病毒核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

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