01?人源化單克隆抗體概述

1.1 單克隆抗體（Monoclonal antibody）

1.2 人源化單克隆抗體（Humanized monoclonal antibody）

又稱互補決定區移植抗體，是在單克隆抗體的技術基礎上發展起來。人源化單克隆抗體是將單克隆抗體的氨基酸序列置換為人源序列，既保留能與抗原結合的特性，又具有與天然人源抗體相似或相同的結構特性。

1.3 人源化單克隆抗體的分類及制備方法

根據人源化程度，可將人源化單克隆抗體分成三類：嵌合抗體、改型抗體和全人源抗體。當前，人源化單克隆抗體的制備方法主要有基因重組表達和基因工程小鼠兩種。

基因重組表達法：先構建抗體的基因表達載體，然后利用原核、真核等表達系統，在體外進行抗體表達。

基因工程小鼠法：先用人源目的基因置換小鼠抗體基因，構建轉基因小鼠模型，再通過經典的雜交瘤細胞技術獲得細胞系，進而制備人源化單克隆抗體。小鼠基因組與人類基因組高度相似，且更易于操作和改變，所以通過基因工程小鼠技術產生的人源化單克隆抗體，其生物學特性與人源抗體更接近。

維潤賽潤的人源化單克隆抗體是采用基因工程小鼠法。

人源化單克隆抗體可以應用于體外診斷領域，用于制備參考品（質控品、校準品和標準品）和免疫測定（包被原和標記原）。

當前，商品化的抗原類參考品（質控品、校準品和標準品），其目標分析物來源于病態血清或重組蛋白。但是商品化的抗體類參考品主要來源于病態血清。究其原因，就是參考品與檢測試劑盒的適配問題。

以間接ELISA檢測抗體為例。在該免疫測定中，抗體參考品有兩個主要功能：a.特異性結合固相上的包被原；b.被二抗特異性結合。

檢測人抗體的試劑盒，其配套的二抗（如鼠抗人、羊抗人等）只能特異性結合人源抗體，不能識別鼠源或其他動物源性的抗體。因此，目前應用廣泛的鼠源抗體，不適合制備抗體參考品。

人源化單克隆抗體可以特異性結合包被原，其顯著特點是氨基酸序列經過人源化改造，具有與天然人源抗體一致的生物學特性，可以被鼠抗人、羊抗人等二抗結合。

因此，人源化單克隆抗體滿足作為抗體參考品的要求，適用于制備質控品、校準品和標準品

2.1.2 人源化單克隆抗體制備參考品的應用舉例

? ? A.雅培Abbott用弓形蟲人源化單克隆抗體制備質控品和校準品，與試劑盒配套的參考品對比。結果顯示，兩者呈正相關，IgG類人源化單克隆抗體的r2是0.985，IgM類人源化單克隆抗體的r2是0.999。

結果證明，所用的弓形蟲人源化單克隆抗校準品與人血漿校準品的靈敏度高度相近。

B. 雅培Abbott測試了弓形蟲人源化單克隆抗體與其他病原體的交叉反應情況。結果顯示，病態血清來源的質控品與登革熱病毒、EB病毒、人類單純皰疹6型、鉤端螺旋體、水痘-帶狀皰疹病毒、西尼羅病毒產生嚴重的交叉反應，而人源化單克隆抗體制備的質控品無此現象。

結果證明，相比病態血清來源的質控品，人源化單克隆抗體制備的質控品具有更高的特異性。

小結：

人源化單克隆抗體可以用于制備參考品（質控品、校準品和標準品），且因為單克隆抗體本身具備的高均一性、高親和力、高特異性和可工業化量產等特點，是制備參考品的最佳選擇之一。

以雙抗體夾心法的HAMA效應為例。人抗鼠抗體（ Humananti-mouse antibody，HAMA）存在臨床血清（漿）標本中，這些抗體可以跟免疫測定使用的鼠源抗體結合，干擾免疫分析系統，造成試驗結果偏差，稱之為HAMA效應。在無抗原存在情況下，HAMA可以橋連包被抗體和標記抗體，造成假陽性。在抗原存在情況下，HAMA與標記抗體競爭結合包被抗體，造成假陰性。（同理，其他動物源性抗體也能產生此現象）

人源化單克隆抗體不能被HAMA結合，可以有效避免HAMA效應。

A. 丁衛平的血篩研究表明，獻血者HBsAg和HIV雙假陽性是由HAMA導致。該批血液樣本經疾控中心檢測，顯示HAMA濃度為50.5 ng/mL（正常參考值：5.0-12.5 ng/mL）。

B.在譚詩的報告中，樣本用HBR阻斷劑處理前后，檢測結果相差較大。證明HAMA可以影響檢驗結果。

C. 在Yong Xie的研究中，分別檢測HAMA與hHP-1（人源化單克隆抗體）、HP-1（鼠源性單克隆抗體）、天然人IgG的結合情況。結果表明，HAMA可以與HP-1（鼠源性單克隆抗體）結合，影響檢測結果，而hHP-1（人源化單克隆抗體）和天然人IgG均不受影響。

小結：

人源化單克隆抗體用于免疫測定，可以有效避免內源性干擾，使檢測結果更準確。

03 維潤賽潤人源化單克隆抗體

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